Progress
| Cloning | Transfection | Induction | Cytometry | Data Analysis |
|---|
| | | | | |
Background
The BCR setup that we used in iGEM (CD79X-TCS-Gal4VP16 and Syk-15-TEVp) resulted in an inverted signal i.e. lower output when the BCR was activated with antiIgM than when unactivated. We expect that this inverted signal was a result of how fusing proteins to TEVp and TCS affected the sterics of their interaction. We think that when Syk was recruited to the activated BCR, it was no longer able to access the TCS, resulting in lower signal than background. This experiment aims to optimize the relative positions of the system's components by finding the optimal fusion protein linker lengths. We want to find the optimal length of the CD79-XnTCSXc-Gal4VP16 linker (where Xn and Xc are the number of amino acids of the n terminal and c terminal side of the TCS, respectively) and the Syk-TEVp linker. Optimizing 3 factors simultaneously gives a 3D search space as shown below. We chose data points in a way that maximized the space explored in the least number of points.
Image Modified
Image Modified
Approach
For ease of screening to identify correct linker constructs, we want to clone Protein1-pTet:mRFP-Protein2
...
constructs.
Parts
Part | h:CA-pT:RFP-G4 | h:CA-pT:RFP-G4 | TRE:Syk-pT:RFP-G4 |
Status | | Need SDM to correct BsaI site in Gal4 | |
Part | hEF1a:Heavy | hEF1a:Light | UAS:mKate |
Status | | | |
hEF1a:CD79A-XnTCSXc-Gal4VP16
| 3TCS3 | | 9TCS3 | | 15TCS3 |
| | | | | |
| | 6TCS6 | 9TCS6 | 12TCS6 | |
| | | | | |
| 3TCS9 | 6TCS9 | 9TCS9 | 12TCS9 | 15TCS9 |
| | | | | |
| | 6TCS12 | 9TCS12 | 12TCS12 | |
| | | | | |
| 3TCS15 | | 9TCS15 | | 15TCS15 |
| | | | | |
TRE:Syk-X-tTEVp
Procedure
Controls
| Untransfected | Single Color Blue | Single Color Red | Double Color | -VE control (background activation) | -VE control (background cleavage) | +VE control |
|---|
| HEK293 | HEK293 hEF1a:rtTA hEF1a:MabH hEF1a:MabL hEF1a:Lyn hEF1a:eBFP hEF1a:CD79A-15TCS15-G4VP16 hEF1a:CD79B TRE:Syk-15-tTEVp
Dox x uM | HEK293 hEF1a:rtTA hEF1a:MabH hEF1a:MabL hEF1a:Lyn hEF1a:mKate hEF1a:CD79A-15TCS15-G4VP16 hEF1a:CD79B TRE:Syk-15-tTEVp
Dox x uM | HEK293 hEF1a:rtTA hEF1a:MabH hEF1a:MabL hEF1a:Lyn hEF1a:eBFP hEF1a:mKate hEF1a:CD79A-15TCS15-G4VP16 hEF1a:CD79B TRE:Syk-15-tTEVp
Dox x uM | HEK293 hEF1a:rtTA hEF1a:MabH hEF1a:MabL hEF1a:Lyn hEF1a:eBFP UAS:mKate hEF1a:CD79A
hEF1a:CD79B TRE:Syk-15-tTEVp
Dox x uM | HEK293 hEF1a:rtTA hEF1a:MabH hEF1a:MabL hEF1a:Lyn hEF1a:eBFP UAS:mKate hEF1a:CD79A-15TCS15-G4VP16 hEF1a:CD79B TRE:Syk
Dox x uM | HEK293 hEF1a:rtTA hEF1a:MabH hEF1a:MabL hEF1a:Lyn hEF1a:eBFP UAS:mKate hEF1a:CD79A hEF1a:CD79B TRE:Syk-15-tTEVp hEF1a:GAl4VP16
Dox x uM |
* Maximum linker lengths were used in controls to evaluate the maximum background activation (CD79A-15TCS15-Gal4VP16) and maximum background cleavage (Syk-15-tTEVp)
Experimental Conditions
- anti IgM | + anti IgM |
|---|
HEK293 hEF1a:rtTA hEF1a:MabH hEF1a:MabL hEF1a:Lyn hEF1a:eBFP UAS:mKate hEF1a:CD79A-XnTCSXc-Gal4VP16 hEF1a:CD79B TRE:Syk-Xs-tTEVp dox x uM | HEK293 hEF1a:rtTA hEF1a:MabH hEF1a:MabL hEF1a:Lyn hEF1a:eBFP UAS:mKate hEF1a:CD79A-XnTCSXc-Gal4VP16 hEF1a:CD79B TRE:Syk-Xs-tTEVp
dox x uM anti IgM x uM |
| Xs | XnTCSXc |
|---|
| S3 | 3tcs3, 3tcs15, 9tcs9, 15tcs3, 15tcs15 |
| S6 | 6tcs6, 6tcs12, 9tcs9, 12tcs6, 12tcs12 |
| S9 | 3tcs9, 6tcs9, 9tcs3, 9tcs6, 9tcs9, 9tcs12, 9tcs15, 12tcs9, 15tcs9 |
| S12 | 6tcs6, 6tcs12, 9tcs9, 12tcs6, 12tcs12 |
| S15 | 3tcs3, 3tcs15, 9tcs9, 15tcs3, 15tcs15 |
| Expand |
|---|
|
Plate 1 Plate 2 WELL 25 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-3tcs3-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-3-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM | WELL 26 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-3tcs3-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-3-tTEVp 50ng Dummy DNA50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | WELL 27 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-3tcs15-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-3-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM | WELL 28 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-3tcs15-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-3-tTEVp 50ng Dummy DNA50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | WELL 29 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-9tcs9-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-3-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM | WELL 30 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-9tcs9-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-3-tTEVp 50ng Dummy DNA50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | WELL 31 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-15tcs3-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-3-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM | WELL 32 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-15tcs3-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-3-tTEVp 50ng Dummy DNA50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | WELL 33 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-15tcs15-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-3-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM | WELL 34 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-15tcs15-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-3-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM
| | | WELL 37 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-6TCS6-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-6-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng Dox 1 nM | WELL 38 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-6TCS6-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-6-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | WELL 39 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-6TCS12-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-6-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng Dox 1 nM | WELL 40 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-6TCS12-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-6-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | WELL 41 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-9TCS9-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-6-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng Dox 1 nM | WELL 42 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-9TCS9-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-6-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | WELL 43 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-12TCS6-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-6-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM | WELL 44 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-12TCS6-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-6-tTEVp 50ng Dummy DNA50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | WELL 45 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-12TCS12-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-6-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM | WELL 46 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-12TCS12-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-6-tTEVp 50ng Dummy DNA50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | | |
Plate 3 WELL 49 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-3TCS9-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-9-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM | WELL 50 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-3TCS9-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-9-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | WELL 51 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-6TCS9-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-9-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM | WELL 52 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-6TCS9-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-9-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | WELL 53 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-9TCS3-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-9-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM | WELL 54 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-9TCS3-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-9-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | WELL 55 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-9TCS6-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-9-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM | WELL 56 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-9TCS6-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-9-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | WELL 57 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-9TCS9-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-9-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM | WELL 58 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-9TCS9-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-9-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | WELL 59 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-9TCS12-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-9-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM | WELL 60 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-9TCS12-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-9-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | WELL 61 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-9TCS15-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-9-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM | WELL 62 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-9TCS15-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-9-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | WELL 63 HEK293 50ng hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-12TCS9-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-9-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM | WELL 64 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-12TCS9-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-9-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | WELL 65 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-15TCS9-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-9-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM | WELL 66 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-15TCS9-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-9-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | | | | | | |
Plate 4 WELL 73 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-6TCS6-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-12-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM
| WELL 74 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-6TCS6-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-12-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | WELL 75 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-6TCS12-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-12-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM | WELL 76 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-6TCS12-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-12-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | WELL 77 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-9TCS9-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-12-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM | WELL 78 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-9TCS9-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-12-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | WELL 79 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-12TCS6-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-12-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM | WELL 80 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-12TCS6-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-12-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | WELL 81 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-12TCS12-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-12-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM
| WELL 82 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-12TCS12-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-12-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | | | WELL 85 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-3TCS3-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-15-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM
| WELL 86 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-3TCS3-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-15-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | WELL 87 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-3TCS15-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-15-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM
| WELL 88 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-3TCS15-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-15-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | WELL 89 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-9TCS9-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-15-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM
| WELL 90 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-9TCS9-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-15-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | WELL 91 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-15TCS3-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-15-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM
| WELL 92 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-15TCS3-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-15-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | WELL 93 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-15TCS15-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-15-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM
| WELL 94 HEK293 hEF1a:rtTA 50ng hEF1a:MabH 50ng hEF1a:MabL 50ng hEF1a:Lyn 50ng hEF1a:eBFP 50ng UAS:mKate 50ng hEF1a:CD79A-15TCS15-Gal4VP16 50ng hEF1a:CD79B 50ng TRE:Syk-15-tTEVp 50ng Dummy DNA 50ng
Dox 1 nM anti IgM x uM | | |
|
Results
Discussion
...