BCR 2.0 CD79B Linker Optimization

Progress

Cloning	Transfection	Induction	Cytometry	Data Analysis

Procedure

Plate map

Plate 1

WELL 1 HEK293	WELL 2 HEK293 hEF1a:rtTA hEF1a:MabH hEF1a:MabL hEF1a:Lyn hEF1a:eBFP hEF1a:CD79A-15TCS15-G4VP16 hEF1a:CD79B TRE:Syk-15-tTEVp Dox x uM	WELL 3 HEK293 hEF1a:rtTA hEF1a:MabH hEF1a:MabL hEF1a:Lyn hEF1a:mKate hEF1a:CD79A-15TCS15-G4VP16 hEF1a:CD79B TRE:Syk-15-tTEVp Dox x uM	WELL 4 HEK293 hEF1a:rtTA hEF1a:MabH hEF1a:MabL hEF1a:Lyn hEF1a:eBFP hEF1a:mKate hEF1a:CD79A hEF1a:CD79B TRE:Syk-15-tTEVp Dox x uM	WELL 5 HEK293 hEF1a:rtTA hEF1a:MabH hEF1a:MabL hEF1a:Lyn hEF1a:eBFP UAS:mKate hEF1a:CD79A-15TCS15-G4VP16 hEF1a:CD79B TRE:Syk Dox x uM	WELL 6 HEK293 hEF1a:rtTA hEF1a:MabH hEF1a:MabL hEF1a:Lyn hEF1a:eBFP UAS:mKate hEF1a:CD79A hEF1a:CD79B TRE:Syk-15-tTEVp Dox x uM
WELL 7 HEK293 hEF1a:rtTA hEF1a:MabH hEF1a:MabL hEF1a:Lyn hEF1a:eBFP UAS:mKate hEF1a:CD79A hEF1a:CD79B TRE:Syk-15-tTEVp hEF1a:GAl4VP16 Dox x uM

Plate 2

WELL 25

HEK293

hEF1a:rtTA50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-3tcs3-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-3-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 26

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-3tcs3-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-3-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 27

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-3tcs15-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-3-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 28

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-3tcs15-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-3-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 29

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9tcs9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-3-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 30

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9tcs9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-3-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 31

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-15tcs3-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-3-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 32

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-15tcs3-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-3-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 33

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-15tcs15-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-3-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 34

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-15tcs15-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-3-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 37

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-6TCS6-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-6-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 38

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-6TCS6-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-6-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 39

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-6TCS12-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-6-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 40

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-6TCS12-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-6-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 41

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-6-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 42

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-6-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 43

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-12TCSX6-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-6-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 44

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-12TCS6-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-6-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 45

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-12TCS12-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-6-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 46

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-12TCS12-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-6-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

Plate 3

WELL 49

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-3TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 50

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-3TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 51

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-6TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 52

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-6TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 53

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS3-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 54

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS3-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 55

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS6-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 56

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS6-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 57

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 58

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 59

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS12-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 60

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS12-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 61

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS15-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 62

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS15-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

dox x uM

anti IgM x uM

WELL 63

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-12TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 64

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-12TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 65

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-15TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 66

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-15TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

Plate 4

WELL 73

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-6TCS6-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-12-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 74

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-6TCS6-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-12-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 75

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-6TCS12-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-12-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 76

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-6TCS12-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-12-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 77

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-12-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 78

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-12-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 79

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-12TCS6-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-12-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 80

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-12TCS6-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-12-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 81

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-12TCS12-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-12-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 82

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-12TCS12-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-12-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 85

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-3TCS3-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 86

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-3TCS3-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 87

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-3TCS15-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 88

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-3TCS15-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 89

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 90

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 91

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-15TCS3-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 92

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-15TCS3-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL 93

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-15TCS15-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

dox 1 nM

WELL 94

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-15TCS15-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

dox 1 nM

anti IgM x uM

Results

Discussion

Background

The BCR setup that we used in iGEM (CD79X-TCS-Gal4VP16 and Syk-15-TEVp) resulted in an inverted signal i.e. lower output when the BCR was activated with antiIgM than when unactivated. We expect that this inverted signal was a result of how fusing proteins to TEVp and TCS affected the sterics of their interaction. We think that when Syk was recruited to the activated BCR, it was no longer able to access the TCS, resulting in lower signal than background. This experiment aims to optimize the relative positions of the system's components by finding the optimal fusion protein linker lengths. We want to find the optimal length of the CD79-XnTCSXc-Gal4VP16 linker (where Xn and Xc are the number of amino acids of the n terminal and c terminal side of the TCS, respectively) and the Syk-TEVp linker. Optimizing 3 factors simultaneously gives a 3D search space as shown below. We chose data points in a way that maximized the space explored in the least number of points.

Approach

For ease of screening to identify correct linker constructs, we want to clone Protein1-pTet:mRFP-Protein2 constructs.

Parts

Part	h:CA-pT:RFP-G4	h:CA-pT:RFP-G4	TRE:Syk-pT:RFP-G4
Status		Need SDM to correct point mutation

Part	hEF1a:Heavy	hEF1a:Light	UAS:mKate
Status

hEF1a:CD79A-XnTCSXc-Gal4VP16

3TCS3		9TCS3		15TCS3

	6TCS6	9TCS6	12TCS6
		no colonies
3TCS9	6TCS9	9TCS9	12TCS9	15TCS9

	6TCS12	9TCS12	12TCS12

3TCS15		9TCS15		15TCS15

hEF1a:CD79B-XnTCSXc-Gal4VP16

3TCS3		9TCS3		15TCS3

	6TCS6	9TCS6	12TCS6

3TCS9	6TCS9	9TCS9	12TCS9	15TCS9

	6TCS12	9TCS12	12TCS12

3TCS15		9TCS15		15TCS15

TRE:Syk-X-TEVp

3	6	9	12	15

Child pages

BCR 2.0 CD79B Linker Optimization

Progress

Procedure

Background

Approach

Parts

Part

Status

Part

Status